Detección de crioglobulinas

FUNDAMENTO

La detección de crioglobulinas se basa en la exposición del suero problema a la acción de una temperatura baja (4ºC)

Si el suero problema contiene crioglobulinas, éstas precipitan con el frío, y el precipitado formado adopta el aspecto de partículas blanquecinas

MATERIAL

• Pipeta Pasteur
• Tubo de ensayo 
• Gradilla
• Baño de agua
• Capilar no heparinizado (azul)
• Plastilina
• Centrífuga hematocrito
• Lector de microhematocrito

MUESTRA

Suero transparente, obtenido de sangre coagulada completamente a temperatura corporal y separado del coágulo en un ambiente cálido.

Es importante evitar que la coagulación se produzca en un ambiente frío, pues esto puede dar lugar a la formación de una pequeña cantidad de crioglobulinas.

PROCEDIMIENTO

1.- Depositamos el suero problema en un tubo de ensayo y centrifugamos a 3500 rpm durante 15 minutos

2.- Colocamos el suero a unos 4ºC y observamos durante 6 dias.

LECTURA DE RESULTADOS
Si aparecen partículas blanquecinas en el suero, lo incubamos a 37ºC. Tras la incubacion, si no desaparecen las particulas , se considera que éstas se deben a restos de fibrina . Cuando estas desaparecen se estima que son crioglobulinas precipitadas (prueba positiva).
   

                                                         El grado de positividad:

                                           ASPECTO SUERO                GRADO POSITIVIDAD

                                           Discretamente turbio ....     +

                                           Francamente turbio .......    ++                

                                           Lechoso  ........................     +++

En el caso en que la prueba sea positiva, puede realizarse una semicuantificación de las crioglobulinas presentes en el suero, mediante la determinación del CRIOCITO.

Para medir el criocito:

  1.- Cogemos de la nevera (4ºC) un tubo capilar hematocrito y llenamos las 3/4 partes de éste con suero problema

  2.- Centrifugamos a 10500 rpm 5 minutos

  3.- Calculamos el % de la columna de precipitado de crioglobulinas y el ocupado por el suero total en forma de porcentaje. 

Estudio de un concentrado de leucocitos

FUNDAMENTO

Cuando centrifugamos la sangre anticoagulada obtenemos tres capas: la inferior con leucocitos, la intermedia con leucocitos y plaquetas (buffy coat), y la capa superior que contiene el plasma.



MATERIAL

• tubo centrífuga
• pipeta Pasteur o automática
• 2 portaobjetos
• Reactivos: panóptico rápido (podemos usar la tinción que queramos) 

MUESTRA
sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO
1.- ,Centrifugar la sangre a 1500 rpm durante 30 minutos
2.- Retiramos el plasma
3.- Cogemos de 0.2 a 0.3 ml de la placa leucoplaquetaria
4.- Realizamos un frotis con unas gotas de la placa leucoplaquetaria
5.- Teñimos con panóptico rápido y miramos al microscopio.

Al observar por el microscopio el frotis con la capa leucoplaquetaria podemos observar numerosos leucocitos de todos los tipos, ademas de facilitarnos la visualización de numerosas plaquetas.

En la práctica realizada en clase no se han observado leucocitos con alteraciones.