Prueba de Rumpel-Leede

FUNDAMENTO

Se aplica un torniquete en un brazo, durante un tiempo determinado. Esto origina un incremento en la presión intracapilar y una anoxia, que son los responsables de la posible producción de extravasaciones sanguíneas, visibles en forma de petequias.

MATERIAL

• Esfigmomanómetro
• fonendoscopio
• reloj

PROCEDIMIENTO
1.. Medimos la presion arterial del paciente, calculando su presión sistólica y diastólica
2.. Trazamos un círculo de unos 5cm de diámetro en la cara anterior del brazo elegido para realizar la prueba, y a unos 5cm de la flexura del codo
3.. colocar el manguito e insuflar aire, mantener el aire 5 minutos. Pasados esos 5 minutos aflojamos el manguito.
4.. Contamos el número de petequias que han aparecido


LECTURA DE RESULTADOS

Las petequias se aprecian como pequeñas manchas cutáneas de color rojo, que están constituidas por acumulo de sangre , y que no desaparecen cuando se ejerce una comprensión con un dedo sobre ellas.

   - El resultado es negativo cuando:Si hay menos de 10 petequias dentro del circulo

   - El resultado es positivo cuando:Hay mas 20 petequias

   - El resultado es dudoso cuando:Hay entre 10 y 20 petequias

Determinación de la velocidad de sedimentación globular (VSG)

FUNDAMENTO

Para la medición de la VSG , se coloca la sangre problema en el interior de un tubo dispuesto verticalmente.En estas condiciones los glóbulos rojos de la sangre tienden a ir cayendo , a favor de la fuerza de la gravedad , hacia la parte inferior del tubo.

En condiciones normales el proceso es lento, pues la fuerza con la que es atraído cada hematíe hacia el fondo del tubo es casi compensada por la fuerza ascendente creada por el plasma al desplazarse hacia arriba.

MATERIAL

• Pipeta y gradilla de Westergreen
• Tubos mezcladores con tapones de goma perforable

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO
1.. Vertemos sangre anticoagulada de la bolsa de hemodonación en un tubo de ensayo
2.. La sangre que hemos vertido en el tubo de ensayo la echamos en un tubo mezclador y con la ayuda de una gradilla lo colocamos verticalmente.
3.. Introducimos la pipeta westergreen en el tubo mezclador y observamos a la hora y a las dos horas.


LECTURA DE RESULTADOS
Los valores normales están escritos en la siguiente tabla:

VSG      1 HORA  2 HORA

Varones  2-7mm   8-15mm Mujeres  3-10mm 12-20mm

Determinación del tiempo de hemorragia (Duke)

FUNDAMENTO
El tiempo de hemorragia se determina efectuando una pequeña herida en la piel y, seguidamente, midiendo el tiempo que tarda en cesar de manar sangre a través de la herida.

MATERIAL

• Algodón 
• Lanceta
• Papel de filtro
• Cronómetro
• REACTIVOS: alcohol

PROCEDIMIENTO
1.. Desinfectamos correctamente el lóbulo de la oreja y pinchamos con ayuda de una lanceta.
2.. Recogemos las gotas de sangre cada 30 segundos con un círculo que ya hemos hecho previamente con papel de filtro. Dejaremos de contar cuando ya no salga sangre.

LECTURA DE RESULTADOS
Contamos las gotas de sangre que hemos recogido y calculamos:
4 gotas x 30 segundos = 2 minutos
El resultado de nuestra práctica es 2 minutos

Electroforesis de hemoglobina

FUNDAMENTO

Con esta práctica vamos a separar las moléculas de la hemoglobina mediante la electroforesis

MATERIAL

• Gradilla
• tubos  de centrífuga
• pipeta pasteur y graduadas, 
• centrífuga, 
• material para electroforesis
• rodillo y placa de vidrio
• agitador
• REACTIVOS: suero fisiológico, agua destilada, solución decolorante (ácido acético 5%), solución transparentadora (metanol+ciclohezanona+ácido acético glacial), cloroformo, metanol, tampón pH 8'8, colorante (negro amido).

MUESTRA 

Preparado de sangre hemolizada

PROCEDIMIENTO

1..Realizamos el hemolizado de la siguiente manera:

• Ponemos 3 ml de sangre anticoagulada en 2 tubos de centrífuga.
• Centrifugamos a 3500 rpm durante 10 minutos y retiramos el sobrenadante.
• Añadimos 4-5 ml de suero fisiológico, homogeneizamos y volvemos a centrifugar.
• Lavamos 3 veces más (en total realizamos 4 lavados)
• En el último lavado, nos quedamos con el sedimento (aproximadamente 1 ml).
• Al sedimento le añadimos medio volumen de cloroformo y 1'5 volumenes de agua destilada (en nuestro caso al tener 1 ml de sedimento añadimos 0'5 ml de cloroformo y 1'5 ml de agua destilada) y volvemos a homogenizar.
•  Volvemos a centrifugar pero a 3500 rpm durante 20 minutos.
• Cogemos el sobrenadante (hemolizado) y lo añadimos en un tubo de ensayo, ya que es la muestra que necesitamos.

2.. Ponemos la solución tampón en la cubeta y colocamos una tira de cellogel en la cubeta y lo empapamos de tampón durante 10 minutos.

3.. Preparamos la fuente de alimentación, la cubeta y los electrodos correctamente (el rojo es el ánodo (+) y el negro es el cátodo (-)).

4.. Sacamos la tira de la cubeta, la secamos un poco con papel de filtro

5.. Colocamos la tira en el puente de manera que la cara absorbente esté hacia arriba (ponemos la esquina cortada en la derecha y mirando hacia nosotros).

6.. Sabiendo que el hemolizado irá del cátodo al ánodo, pondremos una marca lo más cerca del cátodo para indicar dónde colocaremos la muestra.

7.. Empapamos un capilar con el hemolizado y dónde hemos colocado la marca añadimos una línea fina de hemolizado.

8. Tapamos la cubeta y ponemos en marcha el alimentador, a 400 voltios durante 15 minutos.

9. En una bandeja, ponemos negro amido, en otras tres ponemos ácido acético al 5 %, en otra metanol y en otra solución transparentadora.

10.. Pasado el tiempo de la electroforesis, colocamos la tira de cellogel (boca abajo) en la bandeja de negro amido, durante 10 minutos y agitando la bandeja (lo colocamos en un agitador).

11. Pasado el tiempo, colocamos la tira en la bandeja de ácido acético y hacemos 3 lavados de 10 minutos en total (también agitándolo).

12.. Pasado el tiempo, colocamos la tira en metanol durante 1 minuto.

13.. Colocamos la tira en la solución transparentadora entre 2 y 3 minutos.

14.. Sacamos la tira de la  solución transparentadora, la colocamos en una placa de vidrio (cara absorbente hacia abajo) y la aplastamos con el rodillo.

15. Colocamos la placa de vidrio en la estufa hasta que la tira quede transparente (5-6 minutos).

LECTURA DE RESULTADOS

No se han podido diferenciar bandas en nuestra práctica.

Determinación de la sideremia

FUNDAMENTO
Esta técnica se basa en la determinación de la cantidad de hierro con el espectofotómetro y aplicando la fórmula

MATERIAL

• Centrífuga
• Tubos  de ensayo y gradilla
• Micropipeta y puntas de micropipeta
• Espectrofotómetro y cubetas de espectrofotómetro
• REACTIVOS:  R1 tampón, R2 reductor, R3 color, Iron Cal (patrón). 

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO

1.. Enfrentamos dos tubos en la centrífuga. Uno con sangre y otro con agua con la misma cantidad.

2.. Retiramos el sobrenadante (plasma)  y lo colocamos en un tubo de ensayo.

3.. Rotulamos correctamente los tubos y preparamos la siguiente bateria de disoluciones:

 

4.. Mezclamose incubamos durante 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a temperatura ambiente

5.. Rotulamos cada cubeta de igual manera que los tubos y vertemos el contenido de cada tubo en su cubeta correspondiente 

6.. Configuramos el espectofotómetro: 

Longitud de onda 540nm, volumen 100, tempertura 0, tiempo 0

7.. Medimos la absorbancia con el espectofotómetro y anotamos los resultados

LECTURA DE RESULTADOS
Nos han salido valores muy altos debido al mal estado de la sangre.
Para calcular el valor: 
SIDEREMIA(ug/dl) = muestra - blanco muestra/ patrón x concentración del patrón

Determinación de la concentración de hemoglobina

FUNDAMENTO

Determinar la cantidad de hemoglobina en sangre, utilizando la técnica de la cianmetahemoglobina, mediante cálculos y mediante curva de calibración.

MATERIAL

• Tubos de ensayo
• gradilla
• espectrofotómetro
• micropipeta
• pipeta (5ml) y prepipeta
• cubetas de espectrofotómetro.
• REACTIVOS: Hemoglobin 50X (Ferricianuro de potasio (0'60mmol/l), cianuro de potasio (77mmol/l) y dihidrogeno fosfato de potasio (2mmol/l)) y patrón de hemoglobina (a diferentes concentraciones). 

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO
1.. Preparamos la siguiente bateria de pruebas

2.. Mezclamos e incubamos 3 minutos a temperatura ambiente
3.. Preparamos las cubetas rotulándolas igual que los tubos de ensayo
4.. Configuramos el espectofotómetro de la siguiente manera:
     longitud de onda 540nm, volumen 100, temperatura y tiempo 0.
5.. leemos la absorvancia de cada cubeta en el espectofotómetro y anotamos los resultados.

6.. Una vez anotados los datos realizamos una curva de calibración.

Partes de una cubeta y correcta forma de utilizarla.

LECTURA DE RESULTADOS