Gráficas grupos sanguíneos de clase

Gráfica para ABO

Gráfica para Rh

ACTIVIDADES 3ª EVALUACIÓN

PRUEBA CRUZADA MAYOR

1.¿Que se enfrenta en la prueba cruzada mayor?Consiste en enfrentar suero del receptor con los hematíes del donante
2.¿Cuando se debe realizar la prueba cruzada mayor?Cuando se transfunde una gran cantidad de plasma
3.¿Por que debemos realizar la prueba en medio albuminoso y salino?Para detectar todos los anticuerpos presentes
4.¿Que pone de manifiesto el suero antiglobulina de coombs?Detectar los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria

 

DETERMINACION Du

1.¿Que contiene el suero de Coombs?Suero antiglobulina humana
2.¿Que se detecta con la prueba directa?Se detecta el antígeno D
3.¿Que podemos detectar con la prueba indirecta?La presencia del antígeno en la membrana del hematie
4.¿Que buscamos en la sangre del paciente?Aglutinación en presencia del suero
5.¿Que ocurre si el control es positivo?Indica que en la membrana de los hematíes hay antígeno D

DETERMINACIÓN RÁPIDA HB

1.¿Cual es el valor mínimo de hemoglobina que debe tener una mujer antes de la donación?12.5g/dl
2.¿Con que otra solución comparamos la densidad de la sangre?Con la de sulfato de cobre

FENOTIPO Y GENOTIPO RH

1.¿Que antisueros se utilizan en esta técnica? Suero anti-D, suero anti-E,suero anti-C,suero anti-e,suero anti-c

2.¿Por que no existe suero anti-D?Por que el antígeno & es nulo 

3.¿Que expresan los cinco resultados obtenidos?Fenotipo
4.Si la sangre es Rh +¿puede determinarse exactamente su genotipo con respecto al sistema Rh?Existen varios genotipos posibles
5.Si los resultados obtenidos son :D-,D-,E+,c+,e-¿Cuales es el genotipo posible de esta sangre?dcE/dcE

DETERMINACIÓN RH TUBO

1.¿Por que utilizamos el control de albumina?Porque los hematíes revestirse en in vivo de anticuerpos en presencia de producir una agregación que daría la idea de una aglutinación positiva
2.¿Que ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D?Que aparece Coombs indirecta
3.¿Que debemos detectar mediante un Coombs indirecto?Que el paciente no posee un D
4.¿Como se prepara la muestra problema?Lavamos tres veces los hematíes con solución salina fisiológica
Tomamos 0.5 ml de sangre problema y la llenamos a un tubo de centrifuga
Completamos el tubo con solución salina y agitamos suavemente
Centrifugamos durante 4 minutos a 2.000 rpm
Retiramos el sobrenadante y repetimos dos veces mas el proceso

DETERMINACIÓN RH PORTA

1.¿Que tipo de muestra empleamos en este técnica?Sangre total anticoagulada
2.¿Para que se utiliza el visualizador?Para observar el resultado de la reacción
3.¿Que puede dar lugar a falsas aglutinaciones?La mezcla de sangre con albumina bovina
4.¿Que ocurre si aglutina la sección A?No se puede informar los resultados ,esta sección debe ser negativa

DETERMINACIÓN SÉRICA ABO

1.¿Que son los hematíes tipados?Los hematíes tipados suelen ser los grupos A,B y 0
2.¿A que dilucion empleamos los hematíes del paciente?5%
3.¿Que clase de muestra se emplea en esta técnica?Suero
4.¿Que ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación?Puede ser: Si esta en suero es anticuerpos y si es del grupo eritrocitario es ininterpetable

DETERMINACIÓN CELULAR EN PORTA

1.¿Que tipo de técnica inmunologica se emplea en este análisis?La aglutinacion
2.¿Que muestra utilizamos?Sangre capilar
3.¿Como se ve la aglutinación positiva?Cuando aparecen unos grumos rojos que flotan en un liquido claro
4.¿Que debemos hacer si el grupo obtenido es A?Deberán ser ensayados de nuevo con lectina anti-A , de forma que si se produce aglutinación,el sujeto pertenecerá al subgrupo A1

DETERMINACIÓN CELULAR EN TUBO

1.¿Que tipo de técnica inmunologica se emplea en este análisis?La aglutinacion 

2.¿A que concentración se preparala suspensión de hematíes problema?A 2% y el 4 %
3.¿Como se ve una aglutinación positiva?Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendiendo el sedimento
4.¿A que se debe el fenómeno de Rouleaux?A la agrupación no especifica de hematíes , que adoptan una imagen de pilas de monedas
5.¿Como se pueden evitar los falsos positivos?Pueden evitarse con el lavado previo de los hematíes problema

PCR

DIA 1
MATERIAL

• Gradilla
• Micropipeta
• Vaso de precipitado
• Centrifuga
• Papel para film
• Pipeta de vidrio de 5 ml
• Prepipeta 
• Tubos de ensayo
• Ependoff
• Rotulador de vidrio
• Palillo
• Bata
• Guantes
• Papel de fieltro
• REACTIVOS: suero salino, purificador de ácidos nucleicos

MUESTRAMucosa bucal

PROCESAMIENTO1.Añadimos en un vaso de precipitado suero salino
2.Colocamos un tubo de ensayo en la gradilla , y depositamos con una pipeta de vidrio de 5 ml , 3 ml de suero en el tubo
3.Nos enjuagamos la boca con agua y rascamos ambos lados internos de la misma con un palillo
4.Introducimos el palillo en el tubo de ensayo y lo mezclamos unos 2 minutos aproximados
5.Extraemos de ahí 1.4 ul y lo introducimos en un eppendof
6.Lo centrifugamos a 8000 rpm durante 5 minutos
7.Retiramos el sobrenadante
8.Añadimos en el eppendor 70 ul de matriz instangene , e incubamos en una maquina de baño seco durante 10 minutos a 100 grados centigrados
9.Dejamos enfriar y centrifugamos a 13.000 rpm durante 30 minutos
10.Por ultimo extraemos 10 ul del tubo de eppendof y lo depositamos en otro tubo nuevo
11.Lo congelamos



DIA 2

MATERIAL:

• Vaso de precipitado
• Bata
• Guantes
• Micropipeta de 2 ul , 18.5 ul y 2.5 ul
• Puntas 
• de micropipeta
• Centrifuga
• Termociclador
• Tubo de ready to go
• Gradilla de corcho
• Rotulador de vidrio
• REACTIVOS: oligo 1, oligo 2. agua destilada

MUESTRA:2.5 ul de eppendor preparada en la primera parte

PROCEDIMIENTO1.Preparamos el agua destilada en un vaso de precipitado
2.Cogemos una gradilla de corcho y colocamos el eppendof de nuestro ADN y el tubo ready to go
3.Extraemos 2.5 ul de nuestro ADN y lo depositamos en un ready to go y añadimos al mismo 2 ul de aligo 1 y 2 ul de oligo 2 y finalmente 18.5 ul de agua destilada
4.Mezclamos suavemente
5.Centrifugamos un golpe
6.Colocamos el tubo ready to go en el termociclador , cerramos la tapa y ya comienza los 30 ciclos
7.Lo retiramos y se guarda en frigorífico

DIA 3

MATERIAL:

• Balanza
• Pipeta de 10 ml
• Vaso de precipitado
• Rotulador de vidrio
• Microondas
• Matraz
• Probeta de 100 ml
• Micropipeta de 1.5 ul
• Puntas desechables
• Bata
• Guantes
• Vidrio de reloj
• REACTIVOS: agua destilada, agarosa, red safe nucleic.

PROCEDIMIENTO
1.Pesamos 1.5 g de agarosa en la balanza y la depositamos en una probeta de 100 ml
2.Añadimos 10 ml de tampón en la probeta de 100 ml y depositamos la disolución de agarosa
3.A continuación ,enrasamos hasta 100 ml de agua destilada
4.Lo depositamos la mezcla en un matraz Erlenmeyer
5.Calentamos en microondas unos segundos
6.Lo sacamos y lo movemos un poco y lo volvemos a calentar , hasta ver que esta totalmente diluida la mezcla
7.Dejamos enfriar unos minutos
8.Añadimos 1.5 ul de red safe nucleic acid staining solution y ya tenemos lista la agarosa para realizar la electoforesis que seria el ultimo proceso

ELECTROFORESIS

MATERIAL:

• Balanza
• Vidrio de reloj
• Prepipeta
• Pipeta de vidrio de 2 ml
• Probeta de 10 ml
• Cubeta especial
• Cinta adhesiva
• Fuente de alimentación
• Eppendof
• Micropipeta de 10 ul y 5 ul
• Puntas desechables
• Bata
• Guantes
• Papel de fieltro
• REACTIVOS: ladder, agarosa, tampon de carga, tampon TAE

MUESTRA:
Primer eppendof:9 ul de ADN replicado + i ul de tampón de carga
Segundo eppendof: 4.5 ul de ladder + 0.5 ul de tampón de carga

PROCEDIMIENTO
1.Colocamos cinta adhesiva en la cubeta donde se va a depositar agarosa
2.Depositamos agarosa lentamente para que no se produzcan burbujas y lo dejamos actuar unos 30 minutos aproximadamente
3.Retiramos las dos peines y lo colocamos en la bandeja de fuente de alimentación .
4.Los palillos deben estar en cátodo , y la muestra debe moverse hacia el ánodo
5.Añadimos el tampón TAE
6.Añadimos control en las esquinas
7.A continuación ,depositamos en pocillos la muestra , 9 ul de DNA + 1 ul de tampón de carga.
8.Una vez llenados los palillos conectamos los cables en la fuente de alimentación y aplicamos una corriente de 120 voltios durante 30 minutos
9.Visualizamos los fragmentos de ADN en luz ultravioleta

Prueba cruzada mayor

FUNDAMENTO

Consiste en enfrentar el suero del receptor con los hematíes del donante. Primero en medio salino, posteriormente en medio albuminoso, y por ultimo frente al suero antiglobulina de Coombs. 

MATERIAL

• Tubos hemólisis
• Centrífuga
• Baño maría 
• Pipetas Pasteur 
• Gradilla
• Reloj
• REACTIVO: Solucion salina, albúmina, Coombs

MUESTRA

Suero del receptor y hematíes al 5%

PROCEDIMIENTO

1.. En un tubo de ensayo echamos 1 gota de suspensión de hematíes del donante y 2 gotas de suero del receptor

2..Mezclamos y dejamos reposar a temperatura ambiente  3 minutos

3.. leemos el resultado en suero salino

4..Mezclamos e incubamos 37ºC 30 minutos

5.. Centrifugamos 3.500 rpm 30 segundos 

6.. Leemos el resultado

7.. lavamos 3 veces los hematies con solucion salina para eliminar los anticuerpos que no se han unido a los eritrocitos. Retiramos el sobrenadante del último lavado

8.. Añadimos una gota de Coombs y mezclamos

9.. Centrifugamos 1000 rpm 2 minutos. Leemos los resultados

LECTURA DE RESULTADOS

En clase nos ha salido negativo en todos los procesos

Determinación de un Du

FUNDAMENTO
El antígeno Du es un antígeno debil que no se pone de manifiesto en las pruebas normales de determinación del Rh. Por ello debemos sensibilizar previamente los hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos anti , y posteriormente enfrentarlos al suero de Coombs.

MATERIAL

• Tubos centrífuga 
• Pipetas pasteur
• gradilla
• Baño de agua 
• Centrífuga
• REACTIVOS: anti D, antigobulina, solución salina

MUESTRA
Hematíes al 5%

PROCEDIMIENTO
1.. En un tubo echamos una gota de hematies y una gota de anti D
2.. Mezclamos e incubamos a 37ºC 30 minutos
3.. Lavamos los hematíes 3 veces con solución salina, a la tercera decantamos completamente la solución salina
4.. Sobre el sedimento añadimos una gota de Coombs y mezclamos
5.. Centrifugamos 1000rpm 1minuto

Si hay aglutinación es positivo, tendremos el Du. Si no hay aglutinación la sangre se claificará como Rh negativo.
Para que no haya falsos positivos debidos a una sensibilización de los hematíes in vivo, realizaremos una prueba de Coombs directa, con los hematíes problema:
1.. Cogemos una gota de hematíes y añadimos suero fisiológico
2.. Centrifugamos 1000 rpm 1 minuto. Repetimos el proceso 2 o 3 veces más
3.. Resuspendemos el sedimento y añadir suero antiglobulina
4.. Centrifugamos 3500 rpm 30 segundos. Leemos los resultados

Determinación rapida de Hb

FUNDAMENTO
Esta práctica nos permite conocer si el donante está en condiciones o no de donar gracias a la densidad de la gota de sangre. La suspenderemos en sulfato de cobre. Si la gota de sangre se queda en la superficie no podrá donar, ya que el donante tendrá anemia.

MATERIAL

• Lanceta
• algodón
• Alcohol
• Vaso de precipitado

CÓMO PREPARAR LA SOLUCIÓN DE SULFATO
Disolvemos 17g de sulfato en 100 ml de agua destilada y con esto obtnemos la solución madre.
Mezclamos 51ml de la solución madre con 49 ml de agua destilada.

PROCEDIMIENTO
1.. Ponemos en un vaso de precipitado 50ml de sulfato
2.. Echamos una gota de sangre capilar en el vaso y observamos si ésta cae al fondo o se queda en la superficie

LECTURA DE RESULTADOS
En clase esta práctica nos ha salido mal por la densidad del sulfato, ya que todas las gotas que hemos echado han flotado.

Fenotipo y genotipo Rh

FUNDAMENTO
Podemos investigar el genotipo del Rh enfrentando los hematíes problema a distintos antisueros dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh.
Se detecta por una reacción de aglutinación. Los resultados de estas reacciones se trasladan a una tabla donde veremos los genotipos correspondientes

MATERIAL

• Tubos
• Centrífuga
• Rotulador
• Pipeta Pasteur
• Gradillas
• REACTIVOS: anti D, E, C, c, e. 

MUESTRA
Hematíes lavados al 5%

PROCEDIMIENTO
1.. Preparamos los hematies al 5%
2.. Rotulamos 5 tubos de ensayo con D, E, C, d y e
3.. Echamos una gota del antisuero correspondiente en cada tubo y una gota de hematíes al 5% en cada uno de ellos
4.. Centrifugamos a 1.000 rpm 1 minuto
5.. Miramos con ayuda de la lámpara y dando golpes suaves al fondo del tubo para saber si hay o no aglutinación

LECTURA DE RESULTADOS 
En clase nos ha aglutinado en todos los tubos menos en el D, por lo que nuestro Rh es negativo.

Podremos ver exactamente el genotipo y fenotipo en este cuadro:

Determinación de Rh en tubo

FUNDAMENTO
Esta técnica está basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti D.

MATERIAL

• Tubos de ensayo
• Gradilla
• Centrigadora
• REACTIVOS: Anti D y albúmina bovina al 30%

MUESTRA: Sangre venosa

PROCEDIMIENTO

1.. Rotulamos dos tubos, uno con D y otro con A

2.. En el tubo D echamos una gota de anti D y otra de suspensión de hematíes al 5%

3.. En el tubo A echamos una gota de albúmina y otra de suspension de hematies al 5%

4.. Centrifugamos 1000 rpm 1 minuto

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Si observamos aglutinación en el tubo D nuestros hematíes tendrán un Rh positivo. si no observamos aglutinacíon nuestro Rh sera negativo. 

La albumina la utilizamos como control negativo, por lo que no nos debe aglutinar

Determinación grupo Rh en porta

FUNDAMENTO
Esta técnica está basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti D.

MATERIAL

• Porta
• Palillos mezcladores
• lámpara para visualizar el resultado
• rotulador 
• REACTIVOS: Anti D y albúmina bovina al 30%

MUESTRA

Sangre capilar

PROCEDIMIENTO
1.. Dividimos un porta en dos trozos iguales, en un lado rotularemos con A y en otro con S
2.. En el lado de A echaremos una gota de albúmina y otra de hematíes
3.. En el lado S echaremos una gota del suero Anti D y otra de hematíes
4.. movemos haciendo movimientos circulares con ayuda de los palillos mezcladores (uno para cada lado)
5.. Leemos los resultados con ayuda de la lámpara

LECTURA DE RESULTADOS
Si nos aglutina en el lado S tendremos unos hematíes con un Rh positivo. Si no nos aglutina tendremos un Rh negativo.
La albumina la utilizaremos como control negativo, asiq nunca nos debe aglutinar

Determinacion serica ABO

FUNDAMENTO
El suero de un individuo solo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no estan presentes en sus hematies. Al hacer reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B, solo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentado a hematies con antígenos distintos a los de sus propios hematies.

MATERIAL

• Tubos de ensayo
• pipeta Pasteur
• Baño de agua
• centrífuga
• gradilla
• REACTIVOS: Hematíes A1, A2, B y O

MUESTRA: Plasma

PROCEDIMIENTO

1.. Previo a la práctica debemos inactivar el suero incubándolo y preparar una suspesion de hematies al 5%

2..Rotulamos 4 tubos con A, B, AB y O.

3.. En cada tubo echamos una gota de los hematíes correspondiente y dos gotas de suero.

4.. Incubamos a 56ºC 10 minutos 

5.. Centrifugamos 1000 rpm 1 minuto

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Con esta práctica la aglutinación la veremos en el grupo contrario al nuestro.

Por ejemplo si somos A nos aglutinará en B. 

Determinación ceular en tubo

FUNDAMENTO
Consiste en enfrentar hematies a antisueros conocidos para observar aglutinacion y determinar el grupo ABO

MATERIAL

• tubos
• rotulador
• centrífuga
• pipeta pasteur 
• gradilla
• REACTIVOS: anti A, anti B, anti AB, solución salina fisiológica

MUESTRA

Sangre venosa 

PROCEDIMIENTO

1.. Prepararemos una suspensión de hematies al 2%

2.. Rotulamos tres tubos de ensayo con A, B, AB

3.. En cada tubo echaremos 1 gota de hematíes y dos gotas del antisuero correspondiente.

4.. Centrifugamos 1000 rpm durante un minuto y observamos con la ayuda de la lámpara si hay aglutinación

LECTURA DE RESULTADOS

En esta práctica nos ha aglutinado en A y AB, por lo que deducimos que la sangre es AB

Determinación celular en porta

FUNDAMENTO
Con esta práctica observaremos la aglutinacion de los hematíes enfrentados a una serie de antisueros conocidos y de reconocida eficacia, para determinar el grupo ABO del individuo.

MATERIAL

• Porta
• Rotulador
• pipeta Pasteur
• Palillos mezcladores 
• Lámpara

MUESTRA
Sangre capilar

PROCEDIMIENTO
1.. Dividimos un porta por la mitad y rotulados en un lado A y en otro B
2.. El el lado de A echaremos dos gotas: una de suero anti A y otra de sangre
3.. En el lado de B echaremos una gota de suero anti B y otra de sangre
4.. Mezclamos con un palillo de madera para cada lado (usaremos un palillo para A y otro para B)
5.. Observamos visualmente si hay o no aglutinación: Nos ayudaremos de la lámpara, ya que le aportará calor, lo que favorece la aglutinación

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Si observamos aglutinación en el lado A seremos A, si hay en el B seremos B y si hay aglutinación en ambos lados seremos AB.

Estos son los resultados que nos han salido en clase.