Prueba de la sacarosa

FUNDAMENTO
La prueba de la sacarosa consiste en situar los hematíes problema en un medio de baja fuerza iónica como una solución de sacarosa.

MATERIAL

• Pipetas Pasteur y graduadas
• Una micropipeta de 100 ul y puntas de pipeta
• 6 tubos de centrífuga
• Centrífuga y espectofotómetro
• Cubetas para el espectofotómetro
• Gradilla
• REACTIVOS: Solución acuosa de sacarosa, sangre control,solución acuosa de amoniaco, suero fisiológico.

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO
1.. Rotulamos 3 tubos con: SF, SC y SP
2.. Realizamos la siguiente bateria de disoluciones:

TUBOS	SF	SC	SP
SUERO FISIOLÓGICO (ml)	1.8
SOLUCIÓN DE SACAROSA (ml)		1.8
SANGRE CONTROL (ml)		0.2
SANGRE PROBLEMA (ml)	0.2		0.2

3.. Agitamos suavemente los tubos y dejamos 30 minutos en reposo

4.. Centrifugamos 2000rpm 5 minutos

5.. Leemos al espectofotómetro a 540 añadiendo las siguientes cantidades en los tubos y posteriormente en las cubetas:

TUBOS	TB	TPr	TPa
Solución de amoniaco (ml)	5	5	5
Suero fisiológico (ml)	0.3
Sobrenadante SP (ml)		0.3
Sobrenadante SF (ml)			0.3

LECTURA DE RESULTADOS
  tubo blanco TB : 0
  tubo patrón TPr: 0.065 = 31.55%
  tubo problema: 0.206 = 100%

%HEMOLISIS= A/Am x 100