INTRODUCCIÓN
Una muestra la podemos teñir con un colorante ácido, como el azul de metileno, combinándolo con un colorante básico, como la eosina.
De este modo conseguiremos una tinción diferencial capaz de discriminar entre las distintas estructuras celulares según sean basófilas o acidófilas.
Según la proporción de azul de metileno o eosina que compongan el colorante tendremos distintos métodos de tinción. Los más conocidos son: Giemsa, Wright, Leishman y el panóptico rápido de Pappenheim.
PARA REALIZAR LA PRÁCTICA
FUNDAMENTO
Utilizaremos el método de tinción propuesto por Giemsa.
MATERIAL
- Microscopio óptico
- Portas
- Cristalizador
- Puentes de tinción
- Pipetas Pasteur con chupete
- Frascos lavadores
- Tubos de ensayo
- Papel de filtro para cubrir la mesa de trabajo.
- Reactivos: colorante según Giemsa, Solución tampón pH 7,2, metanol y aceite de inmersión.
MUESTRA
Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada.
PROCEDIMIENTO
1.. Colocamos el puente de tinción sobre el cristalizador
2.. Realizamos una extensión de sangre
3.. Una vez realizada la extensión la ponemos sobre el puente de tinción.
4.. Cubrimos con metanol la extensión y esperamos unos 3 minutos que se fije la muestra.
5.. Pasados esos 3 minutos retiramos el metanol escurriéndolo.
6.. En un tubo de ensayo diluimos 0.2 ml de azur-eosina-azul de metileno (Giemsa) con 2ml de solución tampón pH 7,2. Debemos realizar la dilución en el momento de hacer la práctica, ya que no nos valdrá para otro día,
7.. Mezclamos la dilucion realizada en el tubo de ensayo con movimientos circulares suaves. Con una pipeta Pasteur cubrimos la extensión con el colorante realizado anteriormente (Giemsa). Dejamos actuar el colorante durante 25 minutos.
8.. Escurrimos y lavamos con agua del grifo, y posteriormente con tampón pH 7.2 hasta eliminar los restos del colorante.
9.. Dejamos escurrir y secamos en posición vertical.
10.Para ver la muestra al microscopio utilizaremos el objetivo de 100x, por lo que echaremos una gota de aceite de inmersión a la muestra, una vez seca, y la examinaremos al microscopio.
2.. Realizamos una extensión de sangre
3.. Una vez realizada la extensión la ponemos sobre el puente de tinción.
4.. Cubrimos con metanol la extensión y esperamos unos 3 minutos que se fije la muestra.
5.. Pasados esos 3 minutos retiramos el metanol escurriéndolo.
6.. En un tubo de ensayo diluimos 0.2 ml de azur-eosina-azul de metileno (Giemsa) con 2ml de solución tampón pH 7,2. Debemos realizar la dilución en el momento de hacer la práctica, ya que no nos valdrá para otro día,
7.. Mezclamos la dilucion realizada en el tubo de ensayo con movimientos circulares suaves. Con una pipeta Pasteur cubrimos la extensión con el colorante realizado anteriormente (Giemsa). Dejamos actuar el colorante durante 25 minutos.
8.. Escurrimos y lavamos con agua del grifo, y posteriormente con tampón pH 7.2 hasta eliminar los restos del colorante.
9.. Dejamos escurrir y secamos en posición vertical.
10.Para ver la muestra al microscopio utilizaremos el objetivo de 100x, por lo que echaremos una gota de aceite de inmersión a la muestra, una vez seca, y la examinaremos al microscopio.
LECTURA DE RESULTADOS
Los glóbulos rojos se tiñen de color rosa asalmonado y las plaquetas de color violeta.
Los neutrófilos presentan el núcleo de color azul violeta, el citoplasma rosa y la granulación de color violeta rojizo.
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