Tinción de Wright

INTRODUCCIÓN.

Una muestra la podemos teñir con un colorante ácido, como el azul de metileno, combinándolo con un colorante básico, como la eosina. 

De este modo conseguiremos una tinción diferencial capaz de discriminar entre las distintas estructuras celulares según sean basófilas o acidófilas.

Según la proporción de azul de metileno o eosina que compongan el colorante tendremos distintos métodos de tinción. Los más conocidos son: Giemsa, Wright, Leishman y el panóptico rápido de Pappenheim.

PARA REALIZAR LA PRÁCTICA.

FUNDAMENTO

El colorante utilizado es el colorante Wright: una solución de eosina y una mezcla de azul de metileno (del 50 al 75%) y azur B (del 10 al 25%) junto con otros derivados del alcohol metílico.

Dada la presencia de metanol en la composición del colorante, no es necesario un paso previo de fijación antes de la coloración.

Solo fijaremos la extensión si las vamos a guardar sin teñir de un dia para otro, para evitar su deterioro.

MATERIAL

• Microscopio
• Cristalizador
• Puente de tinción
• Pipetas Pasteur con chupete
• Frasco lavador con agua destilada
• Guantes 
• Para sangre venosa: capilar tubo de ensayo, gradilla y bolsa de hemodonación.
• Para sangre capilar: capilar, lanceta, gasa y alcohol para desinfectar.
• Reactivos: solución de eosina-azul de metileno según Wright, solución tampón pH 7,2, aceite de inmersión.

MUESTRA

Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada.

PROCEDIMIENTO

1.. Realizamos una extensión de sangre (venosa o capilar) y dejamos secar al aire.

2.. Con el porta de la extensión colocado horizontalmente sobre el puente de tinción verter 1ml de colorante Wright y dejamos actuar un minuto.

3.. Transcurrido ese minutos escurrimos el colorante Wright y lavamos con solución tampón pH 7,2. Escurrimos bien y dejamos secar en posición vertical.

4.. En un tubo de ensayo diluimos 0'5 ml de colorante según Wright con 0'5 ml de solución tampón pH 7'2. Mezclamos bien en el tubo de ensayo y cubrimos la extensión con la solución. Dejamos teñir durante 3-5 minutos.

5.. Pasados los minutos, lavamos con agua del grifo y más adelante con solución tampón pH 7'2.

6.. Dejamos escurrir y secar en posición vertical.

7.. Colocamos el porta con la muestra en la platina, y con el objetivo de 100x observamos la muestra colocando una gota de aceite de inmersión.

LECTURA DE RESULTADOS.

Las células se observan coloreadas de la misma manera que con la tinción Giemsa.