Fragilidad osmótica de los hematíes

FUNDAMENTO
Valora la resistencia de los eritrocitos a soluciones de presión osmótica decreciente en condiciones constantes de pH y de temperatura

MATERIAL

• Espectofotómetro y cubetas 
• Gradilla
• Pipetas pasteur
• Tubos de ensayo
• Reloj
• REACTIVOS: suero fisiológico y agua destilada

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO
1.. Rotulamos 18 tubos y hacemos la siguiente batería de disoluciones:

nº tubos	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17	18
agua destilada	0	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17
suero fisiológico	18	17	16	15	14	13	12	11	10	9	8	7	6	5	4	3	2	1
concentración obtenida	9	8.5	8	7.5	7	6.5	6	5.5	5	4.5	4	3.5	3	2.5	2	1.5	1	0.5

2.. Añadimos en cada tubo una gota de sangre. Agitamos para homogeneizar. Dejamos reposar 30 minutos
3.. Centrifugamos 2000 rpm 5 minutos
4.. Retiramos el sobrenadante y lo vertemos en las cubetas del espectofotómetro
5.. Medimos la absorbancia con el espectofotómetro y anotamos los resultados

LECTURA DE RESULTADOS
En clase hemos realizado la práctica con 8 tubos. Los resultados han sido:
  Tubo1: 23.39%
  Tubo2: 43.77%
  Tubo3: 65.47%
  Tubo4: 96.50%
  Tubo5: 100%
  Tubo6: 50.18%
  Tubo7: 90.94%
  Tubo8: 96.32%

% DE HEMOLISIS = A/AM x 100
A: absorbancia de cada tubo
A: absorbancia del tubo nº 18

Mezcla con plasma normal

FUNDAMENTO

se dertemina cuando el TP normal y un TTPA alargado, en esta circunstancia se supone , que el paciente sufre un deficit de algun factor de la via intrinseca y en correcto , de los factores VIII , IX o XII

MATERIAL

• Gradilla
• 2cubetas coagulómetro, coagulómetro y varillas de acero
• Micropipeta de 100ul
• Baño de agua 
• Tubos de ensayo
• REACTIVOS: Cloruro cálcico, cefalina activada, pool de plasmas normales o Plasma control normal

MUESTRA
Plasma pobre en plaquetas (PPP)

PROCEDIMIENTO

1.. Cogemos un tubo de ensayo de plástico y echamos 55 ul de PPP y 55 ul de serican anormal

2.. Lo introducimos en el baño María durante 15 minutos a 37ºC

3.. Cuando lo sacamos del baño Maria , ponemos una cubeta en el coagulometro y añadimos 100 ul del contenido de los tubos

4.. Añadimos la varilla de acero y lo dejamos 2 minutos en el coagulómetro

5.. Ponemos 100 ul de cefalina activada

6.. Cuando queden 20 segundos se saca la cubeta y la introducimos debajo del tapón rojo, lo tapamos e introducimos 100 ul de cloruro cálcico

LECTURA DE LOS RESULTADOS
No hemos podido ver los resultados finales por falta de tiempo para la práctica

Preparación de una curva de actividad de la protrombina

FUNDAMENTO 

Para construir una curva de actividad de la protrombina se prepara una batería de disoluciones, a partir de un plasma control normal y se mide el TP del plasma control normal no diluido y de cada una de las disoluciones preparadas

MATERIAL

• 8 Tubos de ensayo
• Pipeta de 1ml
• Prepipeta de 100 y 200ul
• 5 Cubetas de coagulómetro y trocitos de acero
• Coagulómetro
• Baño de agua
• Regla, bolígrafo y hoja de papel milimetrado
• Gradilla
• REACTIVOS: Solución salina, tromboplastina cálcica, pool de plasmas normales o plasma control normal

PROCEDIMIENTO

1.. Centrifugamos la sangre de un compañero de clase

2.. Sacamos el plasma obtenido y lo mezclamos con otro plasma de años anteriores

3.. Rotulamos los 5 tubos de ensayo (100; 50; 33; 25; 10)

4.. Realizamos la siguiente bateria de pruebas:

Pool plasmas ul	200	200	200	200	200
s. salina (ul)	0	200	400	600	1800
Dilución	1/1	½	1/3	¼	1/10
% Actividad	100	50	330	25	10

5.. Rotulamos las cubetas y las introducimos en el coagulometro

6.. Echamos 100 ul de cada tubo en las cubetas

7.. Añadimos en una cubeta reactivo

8.. Ponemos el tubo 100 debajo del tapón rojo y añadimos 200 ul y en los demás tubos hacemos el mismo proceso

9.. Leemos los resultados con el coagulómetro

LECTURA DE RESULTADOS








Plasma control no diluido = 12.3
Plasma control diluido = 19
Plasma control 1/3 = 25.3
Plasma control 1/4 = 32.4
Plasma control 1/10 = 61.3

Prueba de la sacarosa

FUNDAMENTO
La prueba de la sacarosa consiste en situar los hematíes problema en un medio de baja fuerza iónica como una solución de sacarosa.

MATERIAL

• Pipetas Pasteur y graduadas
• Una micropipeta de 100 ul y puntas de pipeta
• 6 tubos de centrífuga
• Centrífuga y espectofotómetro
• Cubetas para el espectofotómetro
• Gradilla
• REACTIVOS: Solución acuosa de sacarosa, sangre control,solución acuosa de amoniaco, suero fisiológico.

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO
1.. Rotulamos 3 tubos con: SF, SC y SP
2.. Realizamos la siguiente bateria de disoluciones:

TUBOS	SF	SC	SP
SUERO FISIOLÓGICO (ml)	1.8
SOLUCIÓN DE SACAROSA (ml)		1.8
SANGRE CONTROL (ml)		0.2
SANGRE PROBLEMA (ml)	0.2		0.2

3.. Agitamos suavemente los tubos y dejamos 30 minutos en reposo

4.. Centrifugamos 2000rpm 5 minutos

5.. Leemos al espectofotómetro a 540 añadiendo las siguientes cantidades en los tubos y posteriormente en las cubetas:

TUBOS	TB	TPr	TPa
Solución de amoniaco (ml)	5	5	5
Suero fisiológico (ml)	0.3
Sobrenadante SP (ml)		0.3
Sobrenadante SF (ml)			0.3

LECTURA DE RESULTADOS
  tubo blanco TB : 0
  tubo patrón TPr: 0.065 = 31.55%
  tubo problema: 0.206 = 100%

%HEMOLISIS= A/Am x 100

Prueba de Rumpel-Leede

FUNDAMENTO

Se aplica un torniquete en un brazo, durante un tiempo determinado. Esto origina un incremento en la presión intracapilar y una anoxia, que son los responsables de la posible producción de extravasaciones sanguíneas, visibles en forma de petequias.

MATERIAL

• Esfigmomanómetro
• fonendoscopio
• reloj

PROCEDIMIENTO
1.. Medimos la presion arterial del paciente, calculando su presión sistólica y diastólica
2.. Trazamos un círculo de unos 5cm de diámetro en la cara anterior del brazo elegido para realizar la prueba, y a unos 5cm de la flexura del codo
3.. colocar el manguito e insuflar aire, mantener el aire 5 minutos. Pasados esos 5 minutos aflojamos el manguito.
4.. Contamos el número de petequias que han aparecido


LECTURA DE RESULTADOS

Las petequias se aprecian como pequeñas manchas cutáneas de color rojo, que están constituidas por acumulo de sangre , y que no desaparecen cuando se ejerce una comprensión con un dedo sobre ellas.

   - El resultado es negativo cuando:Si hay menos de 10 petequias dentro del circulo

   - El resultado es positivo cuando:Hay mas 20 petequias

   - El resultado es dudoso cuando:Hay entre 10 y 20 petequias

Determinación de la velocidad de sedimentación globular (VSG)

FUNDAMENTO

Para la medición de la VSG , se coloca la sangre problema en el interior de un tubo dispuesto verticalmente.En estas condiciones los glóbulos rojos de la sangre tienden a ir cayendo , a favor de la fuerza de la gravedad , hacia la parte inferior del tubo.

En condiciones normales el proceso es lento, pues la fuerza con la que es atraído cada hematíe hacia el fondo del tubo es casi compensada por la fuerza ascendente creada por el plasma al desplazarse hacia arriba.

MATERIAL

• Pipeta y gradilla de Westergreen
• Tubos mezcladores con tapones de goma perforable

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO
1.. Vertemos sangre anticoagulada de la bolsa de hemodonación en un tubo de ensayo
2.. La sangre que hemos vertido en el tubo de ensayo la echamos en un tubo mezclador y con la ayuda de una gradilla lo colocamos verticalmente.
3.. Introducimos la pipeta westergreen en el tubo mezclador y observamos a la hora y a las dos horas.


LECTURA DE RESULTADOS
Los valores normales están escritos en la siguiente tabla:

VSG      1 HORA  2 HORA

Varones  2-7mm   8-15mm Mujeres  3-10mm 12-20mm

Determinación del tiempo de hemorragia (Duke)

FUNDAMENTO
El tiempo de hemorragia se determina efectuando una pequeña herida en la piel y, seguidamente, midiendo el tiempo que tarda en cesar de manar sangre a través de la herida.

MATERIAL

• Algodón 
• Lanceta
• Papel de filtro
• Cronómetro
• REACTIVOS: alcohol

PROCEDIMIENTO
1.. Desinfectamos correctamente el lóbulo de la oreja y pinchamos con ayuda de una lanceta.
2.. Recogemos las gotas de sangre cada 30 segundos con un círculo que ya hemos hecho previamente con papel de filtro. Dejaremos de contar cuando ya no salga sangre.

LECTURA DE RESULTADOS
Contamos las gotas de sangre que hemos recogido y calculamos:
4 gotas x 30 segundos = 2 minutos
El resultado de nuestra práctica es 2 minutos