Determinación grupo Rh en porta

FUNDAMENTO
Esta técnica está basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti D.

MATERIAL

• Porta
• Palillos mezcladores
• lámpara para visualizar el resultado
• rotulador 
• REACTIVOS: Anti D y albúmina bovina al 30%

MUESTRA

Sangre capilar

PROCEDIMIENTO
1.. Dividimos un porta en dos trozos iguales, en un lado rotularemos con A y en otro con S
2.. En el lado de A echaremos una gota de albúmina y otra de hematíes
3.. En el lado S echaremos una gota del suero Anti D y otra de hematíes
4.. movemos haciendo movimientos circulares con ayuda de los palillos mezcladores (uno para cada lado)
5.. Leemos los resultados con ayuda de la lámpara

LECTURA DE RESULTADOS
Si nos aglutina en el lado S tendremos unos hematíes con un Rh positivo. Si no nos aglutina tendremos un Rh negativo.
La albumina la utilizaremos como control negativo, asiq nunca nos debe aglutinar

Determinacion serica ABO

FUNDAMENTO
El suero de un individuo solo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no estan presentes en sus hematies. Al hacer reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B, solo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentado a hematies con antígenos distintos a los de sus propios hematies.

MATERIAL

• Tubos de ensayo
• pipeta Pasteur
• Baño de agua
• centrífuga
• gradilla
• REACTIVOS: Hematíes A1, A2, B y O

MUESTRA: Plasma

PROCEDIMIENTO

1.. Previo a la práctica debemos inactivar el suero incubándolo y preparar una suspesion de hematies al 5%

2..Rotulamos 4 tubos con A, B, AB y O.

3.. En cada tubo echamos una gota de los hematíes correspondiente y dos gotas de suero.

4.. Incubamos a 56ºC 10 minutos 

5.. Centrifugamos 1000 rpm 1 minuto

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Con esta práctica la aglutinación la veremos en el grupo contrario al nuestro.

Por ejemplo si somos A nos aglutinará en B. 

Determinación ceular en tubo

FUNDAMENTO
Consiste en enfrentar hematies a antisueros conocidos para observar aglutinacion y determinar el grupo ABO

MATERIAL

• tubos
• rotulador
• centrífuga
• pipeta pasteur 
• gradilla
• REACTIVOS: anti A, anti B, anti AB, solución salina fisiológica

MUESTRA

Sangre venosa 

PROCEDIMIENTO

1.. Prepararemos una suspensión de hematies al 2%

2.. Rotulamos tres tubos de ensayo con A, B, AB

3.. En cada tubo echaremos 1 gota de hematíes y dos gotas del antisuero correspondiente.

4.. Centrifugamos 1000 rpm durante un minuto y observamos con la ayuda de la lámpara si hay aglutinación

LECTURA DE RESULTADOS

En esta práctica nos ha aglutinado en A y AB, por lo que deducimos que la sangre es AB

Determinación celular en porta

FUNDAMENTO
Con esta práctica observaremos la aglutinacion de los hematíes enfrentados a una serie de antisueros conocidos y de reconocida eficacia, para determinar el grupo ABO del individuo.

MATERIAL

• Porta
• Rotulador
• pipeta Pasteur
• Palillos mezcladores 
• Lámpara

MUESTRA
Sangre capilar

PROCEDIMIENTO
1.. Dividimos un porta por la mitad y rotulados en un lado A y en otro B
2.. El el lado de A echaremos dos gotas: una de suero anti A y otra de sangre
3.. En el lado de B echaremos una gota de suero anti B y otra de sangre
4.. Mezclamos con un palillo de madera para cada lado (usaremos un palillo para A y otro para B)
5.. Observamos visualmente si hay o no aglutinación: Nos ayudaremos de la lámpara, ya que le aportará calor, lo que favorece la aglutinación

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Si observamos aglutinación en el lado A seremos A, si hay en el B seremos B y si hay aglutinación en ambos lados seremos AB.

Estos son los resultados que nos han salido en clase.

Determinación del tiempo de tromboplastina parcial activada

FUNDAMENTO
La recalcificación del plasma pobre en plaquetas (PPP) se realiza mediante la adición de una solución de cloruro cálcico. El sustituto del f3p consiste en una suspensión de fosfolipidos , obtenida a partir de cerebros de conejos, que recibe el nombre de cefalina.

En esta prueba, también se añade con la cefalina unas sustancia activadora de los factores de contacto.Como activadores de los factores de contacto se pueden utilizar: el coalin , el polvo de vidrio , el silice, el celite y el ácido alérgico

MATERIAL

• Gradilla
• Coagulómetro, pocillos y trozos de acero para el coagulómetro
• Micropipeta de 100ul y puntas de micropipeta
• Baño de agua
• 4 tubos de ensayo de plástico
• REACTIVOS: Cloruro cálcico, cefalina activada, plasma control o pool de plasmas normales

MUESTRA
Plasma pobre en plaquetas (PPP)

PROCEDIMIENTO

1.. Llemanos en un tubo de centrifuga de plástico la mitad del tubo de sangre y lo metemos en la centrifuga a 3000 rpr durante 10 minutos

2.. Retiramos el plasma con una pipeta pasteur y lo depositamos en un tubo de plástico

3.. Añadimos en la cubeta 100 ul de plasma y 100 ul de R1

4.. Añadimos en la cubeta 100 ul de R2

5.. Lo dejamos calentar durante dos minutos, cuando queden veinte segundos retiramos e tubo numero 1 y lo depositamos debajo del tapón rojo

6.. Cogemos 100 ul de reactivo R2 y lo añadimos en el tubo numero 1 y leemos el resultado.

LECTURA DE RESULTADOS
En la práctica realizada en clase se han obtenido los siguientes resultados:

   - TTPA de la muestra:  5.3 segundos

   - TTPA del control:  28.1 segundos

Diferencia entre el TTPA de la muestra y el TTPA del control:5.3-28.1= - 22.8

Cociente entre el TTPA de la muestra y el TTPA del control:5.3/28.1=  0.188

Con estos resultados podemos decir que nuestra muestra tiene un TTPA acortado

Test de Howell

FUNDAMENTO
Se vierte el plasma rico en plaquetas (PRP) en un tubo de vidrio, se le añade una solución de cloruro cálcico y se incuba la mezcla a 37ºC.
El resultado del test de Howell es el tiempo transcurrido desde la adicción del Cloruro cálcico al PRP hasta la coagulación de este.

MATERIAL

• 2 tubos de hemólisis 
• 4 micropipetas de 100 ul (0.1ml)
• Baño de agua
• Cronómetro
• REACTIVOS: suero salino, solución de cloruro cálcico, plasma control o pool de plasmas normales

MUESTRA
Plasma rico en plaquetas (PRP)

PROCEDIMIENTO
1.. Atemperamos los reactivos y la muestra a 37ºC.
2.. Rotulamos un tubo de hemólisis con la letra M y otro con la C.
3.. Metemos los tubos en el baño.
4.. Depositamos 0.1ml de muestra en el tubo M y 0.1 de control en el C. Añadimos 0.1ml de solución salina a cada uno
5.. Agregamos 0.1 ml de cloruro cálcico a cada tubo de forma simultanea y ponemos el cronómetro en marcha.
6.. Cogemos los tubos por el extremo superior y los balanceamos suavemente sin sacarlos del agua. Lo haremos a un ritmo de una inclinación por segundo
7.. Parar el cronómetro cuando se aprecie un enturbiamiento y solidificación en los tubos

LECTURA DE RESULTADOS
En la práctica realizada en clase el tubo con la muestra ha tardado en coagular 130 segundos y el control ha tardado 135 segundos.

Los valores normales están establecidos entre 130 y 90 segundos. Por lo que nuestros resultados están dentro de la normalidad

Determinación funcional fribrinógeno

FUNDAMENTO

Según el método de Von Clauss , se basa en la medición del tiempo que tarda un exceso de trombina en degradar a fibrina el fibrinogeno presente en un PPP diluido y , por tanto, en formar un coagulo

El tiempo que tarda en hacerse el coagulo de fibrina depende, de la cantidad inicial de fibrinogeno y es inversamente proporcional a la concentración de este en el plasma estudiado

MATERIAL

• 8 Tubos de ensayo de plástico
• micropipeta de 1000ul 2000ul 100ul y 200ul
• Coagulómetro. cubetas y trocitos de acero
• REACTIVOS: fibrinogene kit, plasma calibrador y agua destilada

MUESTRA
Plasma pobre en plaquetas (PPP)

PROCEDIMIENTO
1.. Homogeneizamos los reactivos
2.. Hacemos la siguiente bateria de diluciones:

Plasma calibrador	100	100	100	100	100	100	100
Muestra	0	0	0	0	0	0	100
Tampón	400	900	1400	1900	2400	2900	900
Fibrinogenemia	1/5	1/10	1/15	1/20	1/25	1/30	1/10

3.. Atemperamos la bovina a temperatura ambiente

4.. Preparamos las cubetas del coagulómetro introduciendo una barilla de acero en su interior y vertemos 200ul de cada dilución en su cubeta correspondiente.

5.. Incubamos a 37ºC dos minutos. Lo hacemos en la placa calefactora del coagulómetro

6.. Colocamos por orden todas las cubetas en el coagulómetro y vertemos 100ul de trombina bovina. En este momento se pondrá en marcha en magnetoagitador y comenzará la lectura.