Determinación de la sideremia

FUNDAMENTO
Esta técnica se basa en la determinación de la cantidad de hierro con el espectofotómetro y aplicando la fórmula

MATERIAL

• Centrífuga
• Tubos  de ensayo y gradilla
• Micropipeta y puntas de micropipeta
• Espectrofotómetro y cubetas de espectrofotómetro
• REACTIVOS:  R1 tampón, R2 reductor, R3 color, Iron Cal (patrón). 

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO

1.. Enfrentamos dos tubos en la centrífuga. Uno con sangre y otro con agua con la misma cantidad.

2.. Retiramos el sobrenadante (plasma)  y lo colocamos en un tubo de ensayo.

3.. Rotulamos correctamente los tubos y preparamos la siguiente bateria de disoluciones:

 

4.. Mezclamose incubamos durante 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a temperatura ambiente

5.. Rotulamos cada cubeta de igual manera que los tubos y vertemos el contenido de cada tubo en su cubeta correspondiente 

6.. Configuramos el espectofotómetro: 

Longitud de onda 540nm, volumen 100, tempertura 0, tiempo 0

7.. Medimos la absorbancia con el espectofotómetro y anotamos los resultados

LECTURA DE RESULTADOS
Nos han salido valores muy altos debido al mal estado de la sangre.
Para calcular el valor: 
SIDEREMIA(ug/dl) = muestra - blanco muestra/ patrón x concentración del patrón

Determinación de la concentración de hemoglobina

FUNDAMENTO

Determinar la cantidad de hemoglobina en sangre, utilizando la técnica de la cianmetahemoglobina, mediante cálculos y mediante curva de calibración.

MATERIAL

• Tubos de ensayo
• gradilla
• espectrofotómetro
• micropipeta
• pipeta (5ml) y prepipeta
• cubetas de espectrofotómetro.
• REACTIVOS: Hemoglobin 50X (Ferricianuro de potasio (0'60mmol/l), cianuro de potasio (77mmol/l) y dihidrogeno fosfato de potasio (2mmol/l)) y patrón de hemoglobina (a diferentes concentraciones). 

MUESTRA
Sangre venosa anticoagulada

PROCEDIMIENTO
1.. Preparamos la siguiente bateria de pruebas

2.. Mezclamos e incubamos 3 minutos a temperatura ambiente
3.. Preparamos las cubetas rotulándolas igual que los tubos de ensayo
4.. Configuramos el espectofotómetro de la siguiente manera:
     longitud de onda 540nm, volumen 100, temperatura y tiempo 0.
5.. leemos la absorvancia de cada cubeta en el espectofotómetro y anotamos los resultados.

6.. Una vez anotados los datos realizamos una curva de calibración.

Partes de una cubeta y correcta forma de utilizarla.

LECTURA DE RESULTADOS

Recuento de hematíes (RBC)

FUNDAMENTO
Se diluye la sangre problema y se cuentan los hematíes en algunos cuadrados de los retículos de la cámara.

INTRODUCCIÓN
El RBC consiste en la determinación del número de eritrocitos presentes en un volumen determinado de sangre, generalmente en 1 mm3

MATERIAL

• Pipeta diluidora de Thoma para glóbulos rojos con tubo de goma 
• Cámara de recuento
• Cubre
• Microscópio
• REACTIVOS: líquido de Hayem

MUESTRA
Sangre venosa

PROCEDIMIENTO
1.- Con la pipeta de Thoma aspiramos con sangre hasta 0.5 si creemos que hay una policitemia o hasta 1 si creemos que hay anemia.
2.- Aspiramos hasta 101 con líquido Hayem
3.- Agitamos 2 o 3 minutos suavemente para homogeneizar la mezcla y desechamos las 3 primeras gotas
4.- Depositamos una gota entre el cubre y la cámara en ambos lados de ésta
5.- Enfocamos con el objetivo de 40x y contamos los hematíes presentes en 80 cuadros del grande central. Para ello contamos las esquinas y el centro, Debemos contar los hematíes situados dentro de los cuadros y los situados arriba y a la derecha, de este modo no contaremos dos veces los mismos hematíes.


LECTURA DE RESULTADOS
Si hay disminución del RBC habrá una anemia, si por el contrario aumentase nos encontrariamos con una policitemia.
Un RBC normal se situa entre 4 y 5.5 en mujeres y entre 4.5 y 6 en hombres.

RBC = H x 5 x 10 x D 
H ... nº hematíes en los 5 cuadrados
D ... puede ser 100 o 200. Según la dilución que hayamos realizado

Recuento de plaquetas (Hemocitómetro)

FUNDAMENTO

Con esta práctica vamos a llevar a cabo un recuento de plaquetas por milímetro cúbico

MATERIAL

• Tubo de ensayo
• Pipeta de Thoma con tubo y boquilla
• Cámara de recuento
• Gasas
• Cubreobjetos
• Placa Petri
• Papel de filtro
• REACTIVOS: agua destilada y liquido de dilución: lab. Spinreact

MUESTRA

Sangre capilar o venosa recientemente extraida y anticoagulada.

PROCEDIMIENTO

1.- Vertemos 1ml de sangre en un tubo de ensayo y 1ml de líquido de dilución en otro

2.- Con la pipeta de Thoma enrasamos con sangre hasta 1 y hasta 101 con el líquido de dilución.

3.- Agitamos suavemente unos 5 minutos

4.- Desechamos las 5 primeras gotas

5.- Cargamos la cámara de recuento y la colocamos en el interior de una cámara húmeda donde vamos a dejarla reposar 15 minutos

6.- Observamos al microscópio con el objetivo de 10x y 40x.

7.- Enfocamos un cuadro grande y contamos el total de plaquetas que hay en él.

PLT/mm3 = P x D x V = P x 1.000

P ... nº de plaquetas en un mm3 

V... correción de volumen (10)

D... correcion de dilución (100)

LECTURA DE RESULTADOS

Recuento de plaquetas (frotis)

INTRODUCCIÓN
En el  recuento de plaquetas (PLT o PLQ) determinamos el número de trombocitos presentes en 1mm cúbico.
Un recuento con contadores electrónicos sería más exacto, pero de esta forma tá,bien podemos hacer un estudio morfológico de los trombocitos.

MATERIAL

• Portaobjetos para frotis
• Papel y bolígrafo
• Reactivo: líquido de inmersión

MUESTRA
Frotis teñido con panóptico rápido.

PROCEDIMIENTO
 1.- Observamos el frotis con el objetivo de inmersión
 2.- Contamos las plaquetas presentes en 10 campos microscópicos
 3.- Calculamos la cifra media del número de plaquetas contadas en los 10 campos

PLT/mm3 = PLT/C x 20.000 

PLT/ mm3 ... nº plaquetas por mm3 de sangre

20.000 ... media del nº de plaquetas contadas en varios campos

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS
Debe haber 1 plaqueta por cada 10 - 20 hematíes, 5 - 25 trombocitos por campo.
Si el nº de plaquetas por mm3 de sangre es inferior a 130.000 hay una trombocitopenia
Si es superior a 400.000 hay una trombocitosis.

Recuento de leucocitos (WBC)

MATERIAL

• Pipeta de Thoma
• Tubo de goma con boquilla para pipeta
• Cámara de recuento
• Cubre
• Reactivos: líquido de dilución Turck.(produce la lisis de los eritrocitos sin alterar los leucocitos. Tambien tiñe el nucleo de éstos con el violeta genciana que contiene)

MUESTRA
Sangre capilar o venosa anticoagulada


PROCEDIMIENTO
1.- Aspiramos la sangre con la pipeta de Thoma hasta 1 y con líquido diluyente hasta 11
2.- Agitamos con movimientos suaves unos 3 minutos
3.- Desechamos las tres primeras gotas
4.- Depositamos una gota entre la cámara y el cubre
5.- Contamos los leucocitos presentes en los 4 cuadros grandes de las esquinas, cada uno dividido en 16 cuadritos. Se cuentan con el     objetivo de 10x




LECTURA DE RESULTADOS

Como se cuentan los leucocitos en 4 cuadros grandes hay que dividir por 4 la cantidad obtenida en el recuento, y así sabremos el número de leucocitos en un cuadrado grande.
Cada cuadro mide 1mm de lado, por eso multiplicamos por 10.
Como la sangre la diluimos, hay que multiplicar el resultado anterior por 10 si se ha enrasado hasta 10 y por 20 si se ha enrasado hasta 0.5.

WBC = L/4 x 10 x 10 ( o 20 )

INTERPRETACION CLINICA
La disminución del WBC se produce en las leucopenias, su aumento se da en la leucocitosis.
Se considera normal un WBC entre 5.000 y 11.000 leucocitos por mm cúbicos.

CON MICROPIPETA haríamos una dilución de 1/10

Determinación índice lobularidad

MATERIAL

• 2 Portas
• Bolígrafo y papel para el cálculo de los resultados
• Reactivos: Líquido de inmersión

MUESTRA
Frotis muy fino teñido con panóptico rápido.

PROCEDIMIENTO
1.- Observamos el frotis con el objetivo de inmersión.
2.- Contamos las lobulaciones de cada neutrófilo encontrado  (Se considera que hay un lobulo cuando una parte del núcleo está unida al resto solamente por un fino puente de cromatina)
3.- Clasificamos los neutrófilos según Arneth, y contar los lóbulos de cada neotrófilo hasta llagar a los 100 neutrófilos.

LECTURA DE RESULTADOS

IL= nº lóbulos contados / nº neutrófilos observados.